4-نیتروفنیل بتا-دی-گالاکتوپیرانوزید CAS: 200422-18-0

اثر: ONPG سوبسترایی است که به طور خاص برای تشخیص حضور و فعالیت آنزیم بتا-گالاکتوزیداز استفاده می‌شود. هنگامی که آنزیم بتا-گالاکتوزیداز وجود داشته و فعال باشد، ONPG را به دو محصول تجزیه می‌کند: اُ-نیتروفنول و یک مشتق گالاکتوز. آزادسازی اُ-نیتروفنول منجر به تغییر رنگ زرد می‌شود که می‌توان آن را با استفاده از اسپکتروفتومتر اندازه‌گیری کرد.

کاربرد: ONPG کاربردهای متعددی در تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی و بیوشیمی دارد:

تعیین فعالیت بتا-گالاکتوزیداز: ONPG معمولاً برای اندازه‌گیری و تعیین کمیت فعالیت آنزیم بتا-گالاکتوزیداز استفاده می‌شود. سرعت تشکیل اُ-نیتروفنول، که مستقیماً با فعالیت آنزیم متناسب است، می‌تواند به صورت اسپکتروفتومتری اندازه‌گیری شود.

بیان و تنظیم ژن: ONPG اغلب در آزمایش‌های مربوط به مطالعات بیان و تنظیم ژن مورد استفاده قرار می‌گیرد. این روش اغلب در سنجش‌های پروتئین فیوژن، مانند سیستم فیوژن lacZ که معمولاً استفاده می‌شود، برای مطالعه بیان ژن‌ها تحت کنترل پروموترهای خاص استفاده می‌شود. فعالیت بتا-گالاکتوزیداز اندازه‌گیری شده با استفاده از ONPG، بینشی در مورد سطح بیان ژن ارائه می‌دهد.

غربالگری فعالیت بتا-گالاکتوزیداز: ONPG می‌تواند به عنوان یک روش غربالگری رنگ‌سنجی در فناوری DNA نوترکیب برای شناسایی وجود و عملکرد ژن LacZ که بتا-گالاکتوزیداز را کد می‌کند، استفاده شود. این روش غربالگری به شناسایی کلون‌هایی که حاوی ژن مورد نظر هستند کمک می‌کند.

مطالعات سینتیک آنزیم: ONPG همچنین در مطالعه سینتیک آنزیم β-گالاکتوزیداز مفید است. با اندازه‌گیری سرعت واکنش آنزیم-سوبسترا در غلظت‌های مختلف سوبسترا، می‌توان پارامترهای سینتیکی مانند ثابت‌های میکائیلیس-منتن (Km) و حداکثر سرعت واکنش (Vmax) را تعیین کرد.