قهرمانان ناشناس زیادی در اطراف ما وجود دارند که به نظر عادی می رسند، اما در واقع در سکوت کمک زیادی به ما می کنند.پروتئیناز K "قهرمان گمنام" در صنعت تشخیص مولکولی است، اگرچه در مقایسه با "بزرگ و قدرتمند" در صنعت، پروتئیناز K به قدری پایین است که ما مدت ها اهمیت آن را نادیده گرفته ایم.با شیوع اپیدمی جدید تاج، تقاضا برای پروتئیناز K افزایش یافته است و عرضه در داخل و خارج از مصرف بسیار عقب است و همه ناگهان متوجه شدند که پروتئیناز K بسیار مهم است.
کاربرد پروتئیناز K چیست؟
پروتئیناز K یک پروتئاز سرین با فعالیت آنزیم پروتئولیتیک است و می تواند فعالیت خود را در طیف وسیعی از محیط ها حفظ کند (pH (4-12.5)، بافر پر نمک، دمای بالای 70 درجه سانتی گراد و غیره.علاوه بر این، فعالیت پروتئیناز K توسط SDS، اوره، EDTA، گوانیدین هیدروکلراید، گوانیدین ایزوتیوسیانات و غیره مهار نمی شود و مقدار معینی از مواد شوینده نیز می تواند فعالیت پروتئیناز K را افزایش دهد. در درمان پزشکی (ضدعفونی ویروسی و میکروبی) مواد غذایی (ترکیب گوشت)، چرم (نرم کننده مو)، شراب سازی (شفاف الکل)، تهیه اسید آمینه (پرهای تخریب شده)، استخراج اسید نوکلئیک، هیبریداسیون درجا و غیره، پروتئیناز K کاربرد دارد.متداول ترین کاربرد استخراج اسید نوکلئیک است.
پروتئیناز K می تواند انواع پروتئین های موجود در نمونه را آنزیمولیز کند، از جمله آن دسته از هیستون هایی که به شدت به اسیدهای نوکلئیک متصل هستند، به طوری که اسیدهای نوکلئیک می توانند از نمونه آزاد شده و در عصاره آزاد شوند و مرحله بعدی استخراج و خالص سازی را تسهیل می کند.در تشخیص نوکلئیک اسید ویروسی، پروتئیناز K یکی از اجزای مهم در محلول نمونه برداری ویروس است.پروتئیناز K می تواند پروتئین پوششی ویروس را شکسته و غیرفعال کند که در مرحله انتقال و تشخیص ایمن تر است.علاوه بر این، پروتئیناز K همچنین می تواند RNase را تجزیه کند، از تخریب RNA ویروسی جلوگیری می کند و تشخیص اسید نوکلئیک را تسهیل می کند.
شهرت یک شبه پروتئیناز K
چه در زمینه تحقیقات علمی و چه در زمینه IVD، استخراج اسید نوکلئیک اساسی ترین آزمایش است، بنابراین پروتئیناز K همیشه وجود بسیار مهمی داشته است.با این حال، در گذشته، پروتئیناز K بسیار کمتر از نقش آن شناخته شده بود.بخش بزرگی از این به این دلیل بود که رابطه عرضه و تقاضای پروتئیناز K بسیار پایدار بود.تعداد کمی از مردم فکر می کنند که تامین پروتئیناز K مشکل ساز باشد.
با شیوع اپیدمی جدید تاج، تقاضا برای آزمایش اسید نوکلئیک افزایش یافته است.تا اواخر ژوئن 2020، چین نزدیک به 90 میلیون آزمایش تاج جدید را تکمیل کرده است و این تعداد در مقیاس جهانی حتی نگران‌کننده‌تر است.در آزمایشات استخراج اسید نوکلئیک، غلظت کاری پروتئیناز K حدود 50-200 میکروگرم در میلی لیتر است.به طور کلی، حدود 100 میکروگرم پروتئیناز K برای استخراج یک نمونه از اسید نوکلئیک لازم است.در استفاده واقعی، به منظور افزایش کارایی استخراج اسید نوکلئیک، اغلب از پروتئیناز K به مقدار زیاد استفاده می شود.شناسایی اسید نوکلئیک برای ویروس کرونا جدید، تقاضای زیادی برای پروتئیناز K را به همراه داشته است.تعادل عرضه و تقاضای اولیه پروتئیناز K به سرعت شکسته شد و پروتئیناز K یک شبه به یک ماده مهم پیشگیری از بیماری همه گیر تبدیل شد.
مشکلات در تولید پروتئیناز K
اگرچه با گسترش همه‌گیری، ارزش مهم پروتئیناز K مورد توجه مردم قرار گرفته است، اما شرم‌آور است که به دلیل پایین بودن بیش از حد پروتئیناز K، تعداد کمی از شرکت‌های داخلی در تولید پروتئیناز K مشارکت داشته باشند. می خواهید تولید پروتئیناز K را ایجاد کنید در طول فرآیند تولید، مشخص شد که پروتئیناز K یک پروتئین بسیار ویژه است.افزایش ظرفیت تولید پروتئیناز K در مدت زمان کوتاه بسیار چالش برانگیز است.
تولید پروتئیناز K در مقیاس بزرگ با مشکلات زیر مواجه است
1. بیان کم
پروتئیناز K می تواند به طور غیر اختصاصی اکثر پروتئین ها را تخریب کند و باعث سمیت جدی برای بیان سلول میزبان شود.بنابراین، سطح بیان پروتئیناز K به طور کلی بسیار پایین است.غربالگری سیستم‌های بیان و سویه‌هایی که پروتئیناز K را بسیار بیان می‌کنند، عموماً به چرخه طولانی‌تری نیاز دارد.
2. باقیمانده رنگدانه ها و اسیدهای نوکلئیک
تخمیر در مقیاس بزرگ مقدار زیادی رنگدانه و باقی مانده های اسید نوکلئیک میزبان را معرفی می کند.حذف این ناخالصی ها با یک فرآیند تصفیه ساده دشوار است و تصفیه پیچیده باعث افزایش هزینه و کاهش نرخ بازیابی می شود.
3. بی ثباتی
پروتئیناز K به اندازه کافی پایدار نیست، می تواند خود را آنزیمولیز کند و نگهداری آن در دمای 37 درجه سانتیگراد برای مدت طولانی بدون عامل محافظ مشکل است.
4. رسوب آسان
هنگام تهیه پودر انجمادی پروتئیناز K، به منظور اطمینان از اینکه محتوای جامد پروتئیناز K در پودر خشک شده انجمادی زیاد است، لازم است یک عامل محافظتی خشک شده با غلظت بالا اضافه شود، اما زمانی که غلظت پروتئیناز K به 20 میلی گرم در میلی لیتر و بالاتر می رسد، آسان است. تجمع یک رسوب را تشکیل می دهد که برای خشک کردن انجمادی پروتئیناز K با محتوای جامد بالا مشکلات زیادی را به همراه دارد.
5. سرمایه گذاری بزرگ
پروتئیناز K دارای فعالیت پروتئاز قوی است و می تواند سایر پروتئازها را در آزمایشگاه هیدرولیز کند.بنابراین پروتئیناز K به مناطق تولید، تجهیزات و پرسنل تخصصی برای تحقیق و توسعه و تولید نیاز دارد.
محلول پروتئیناز K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM دارای یک پلت فرم بیان و خالص سازی پروتئین بالغ است و دارای تجربه غنی در بیان و خالص سازی پروتئین های نوترکیب و بهینه سازی فرآیندهای تولید است.از طریق تشکیل سریع یک تیم تحقیق و توسعه، فرآیند تولید پروتئیناز K در مقیاس بزرگ غلبه کرده است.خروجی ماهانه پودر یخ زده بیش از 30 کیلوگرم است.این محصول دارای عملکرد پایدار، فعالیت خاص آنزیمی بالا، و بدون باقی مانده سیتوکروم میزبان و اسید نوکلئیک است.به تماس با XD BIOCHEM خوش آمدید دریافت بسته آزمایشی (ایمیل:sales@xdbiochem.comتلفن: +86 513 81163739).
راه حل های فنی XD BIOCHEM شامل
با استفاده از یکپارچه سازی پلاسمید چند کپی، سویه های با بیان بالا با سطح بیان 8 گرم در لیتر انتخاب می شوند که بر مشکل سطح بیان پایین پروتئیناز K غلبه می کند.
از طریق ایجاد یک فرآیند تصفیه چند مرحله‌ای، باقی مانده‌های سیتوکروم میزبان و اسید نوکلئیک پروتئیناز K با موفقیت زیر مقدار استاندارد حذف شدند.
از طریق غربالگری با کارایی بالا از فرمول‌های بافر محافظ، بافری انتخاب شد که می‌تواند پروتئیناز K را به طور پایدار در دمای 37 درجه سانتیگراد ذخیره کند.
بافرهای غربالگری بر این مشکل غلبه می‌کنند که پروتئیناز K به راحتی در غلظت‌های بالا انباشته و رسوب می‌کند، و پایه‌ای را برای خشک کردن انجمادی با محتوای جامد بالای پروتئیناز K ایجاد می‌کند.
نمونه XD BIOCHEM پروتئیناز K
تست پایداری پروتئیناز K XD BIOCHEM: هیچ تغییر قابل توجهی در فعالیت پس از 80 روز در دمای اتاق وجود نخواهد داشت.
تست پایداری پروتئیناز K XD BIOCHEM: پس از 80 روز در دمای اتاق تغییر قابل توجهی در فعالیت وجود نخواهد داشت.
مقایسه اثر استخراج اسید نوکلئیک پروتئیناز K XD BIOCHEM و محصولات رقیب.در فرآیند استخراج اسید نوکلئیک به ترتیب از XD BIOCHEM و پروتئیناز K رقابتی استفاده می شود.راندمان استخراج XD BIOCHEM پروتئیناز K بالاتر و مقدار Ct ژن هدف کمتر است.
زمان ارسال: دسامبر-31-2021