4-نیتروفنیل بتا-D-گالاکتوپیرانوسید CAS:200422-18-0

اثر: ONPG بستری است که به طور خاص برای تشخیص حضور و فعالیت آنزیم β-گالاکتوزیداز استفاده می شود.هنگامی که آنزیم β-گالاکتوزیداز موجود و فعال است، ONPG را به دو محصول تقسیم می کند: o-nitrophenol و یک مشتق گالاکتوز.آزادسازی o-nitrophenol منجر به تغییر رنگ زرد می شود که با استفاده از اسپکتروفتومتر قابل اندازه گیری است.

کاربرد: ONPG کاربردهای متعددی در تحقیقات بیولوژی مولکولی و بیوشیمی دارد:

تعیین فعالیت β-گالاکتوزیداز: ONPG معمولاً برای اندازه گیری و کمیت فعالیت آنزیم β-گالاکتوزیداز استفاده می شود.سرعت تشکیل o-nitrophenol که با فعالیت آنزیم رابطه مستقیم دارد، می تواند به روش اسپکتروفتومتری اندازه گیری شود.

بیان ژن و تنظیم: ONPG اغلب در آزمایشات مربوط به بیان ژن و مطالعات تنظیم استفاده می شود.این اغلب در سنجش پروتئین فیوژن، مانند سیستم همجوشی lacZ که معمولاً استفاده می‌شود، برای مطالعه بیان ژن‌ها تحت کنترل پروموترهای خاص استفاده می‌شود.فعالیت بتا-گالاکتوزیداز اندازه گیری شده با استفاده از ONPG بینش هایی را در مورد سطح بیان ژن فراهم می کند.

غربالگری فعالیت β-گالاکتوزیداز: ONPG می تواند به عنوان یک روش غربالگری رنگ سنجی در فناوری DNA نوترکیب برای شناسایی حضور و عملکرد ژن LacZ، که بتا-گالاکتوزیداز را کد می کند، استفاده شود.این روش غربالگری به شناسایی کلون هایی که حاوی ژن مورد نظر هستند کمک می کند.

مطالعات سینتیک آنزیم: ONPG همچنین در مطالعه سینتیک آنزیم β-گالاکتوزیداز مفید است.با اندازه‌گیری سرعت واکنش آنزیم- سوبسترا در غلظت‌های مختلف سوبسترا، می‌توان پارامترهای جنبشی مانند ثابت‌های Michaelis-Menten (Km) و حداکثر سرعت واکنش (Vmax) را تعیین کرد.